天胡荽药材中槲皮素的实验鉴定论文
1 仪器与试药
Agilent1100型高效液相色谱仪(自动进样品),二极管阵列检测器(DAD); AB104-N型电子天平(德国Mettler-Toledo Group公司);薄层色谱硅胶G(青岛海洋化工有限公司);乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为重蒸镏水;槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100081-200406);10批天胡荽药材样品采自贵州各地,经笔者鉴定为伞形科植物天胡荽Hydrocotyle sibthorpioides Lam.和破铜钱Hydrocotyle sibthorpioides Lam.Var.batrachium(Hance)Hand.-Mazz.ex Shan的干燥全草。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 供试品溶液的制备
取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约3 g,精密称重,置圆底烧瓶中,精密加入甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)提取液75 ml,置水浴中加热回流1 h,滤过,将滤液水浴蒸干,用适量蒸馏水溶解,移至分液漏斗中,加醋酸乙酯30 ml(10,10,10 ml)萃取,合并醋酸乙酯萃取液,减压回收醋酸乙酯至干,残渣加甲醇3ml使溶解,取上清液作为供试品溶液。
2.1.2 对照品溶液的制备
精密称取槲皮素对照品13.6 mg,置50 ml的量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
2.1.3 薄层色谱法[4]
照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及槲皮素对照品溶液各10 μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂,置盐酸蒸气饱和的展开缸内,展开,取出,晾干。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.2 HPLC测定
2.2.1 色谱条件
色谱柱为Dikma公司Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈- 0.1%磷酸(45∶55);流速0.8 ml/min。检测波长370 nm,柱温25℃。进样量10 μl。理论塔板数按槲皮素计算,应不低于5 000。在此色谱条件下,槲皮素对照品、天胡荽药材的HPLC图谱见图1~2。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密吸取“2.1.2”项下的槲皮素对照品溶液1ml,置25ml的容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液。取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约0.5 g,精密称重,置50 ml具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)提取液25 ml,称定重量,置水浴中加热回流1 h,放冷,称重,用提取液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液5 ml至25 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm) 滤过,取续滤液,即得供试品溶液。
2.2.3 线性关系考察
精密吸取槲皮素对照品溶液1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 μl,进样,测定峰面积,以色谱峰面积为纵坐标, 槲皮素进样量为横坐标,进行线性回归分析,线性回归方程: Y=6 442.9X-1.491 5,r=0.999 8,结果表明槲皮素在0.010 88~0.108 8 μg进样量与峰面积的`线性关系良好。对照品溶液10 μl,连续进样5次,记录色谱图,结果槲皮素峰面积的RSD为0.19%。取同一供试品溶液,分别在0,2,4,6,8,10 h进样,记录色谱图,结果槲皮素峰面积的RSD为1.15%。表明供试品溶液在10 h内稳定。取同批药材5份,精密称定,按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法制备并测定,槲皮素平均含量为0.11%,RSD为0.96%。
3 结果
天胡荽为伞形科植物天胡荽或破铜钱的干燥全草,具有清热解毒、利湿之功效,用于黄疸型肝炎、胆结石、目翳[1]治疗。天胡荽含槲皮素(quercetin)、槲皮素-3-半乳糖苷(quercetin-3-galactoside)等黄酮类化合物[2],其中槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突变等多种功能[3],是天胡荽药材的有效成分之一。通过实验发现,在槽内先加入展开剂,再在展开缸内用小烧杯盛上盐酸,然后进行薄层板预饱和30min,再展开,其色谱斑点圆而集中,分离度较好。天胡荽药材除了含有槲皮素外,还有多种黄酮苷,本文以盐酸和硫酸作为水解酸进行了比较,还对水解酸的浓度、溶剂和提取时间进行了考察。结果本文所用的条件较好。
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