含蓝莓花色苷的谷物发酵物抗疲劳作用讨论论文

　　含蓝莓花色苷的谷物发酵物( fermented graincontainingblueberry anthocyanins，LH，蓝禾) 采用复合酶发酵工艺，含有多种活性成分。国内外研究报道，蓝莓花色苷具有抗氧化、抗炎、预防慢性病、提高学习记忆力、改善血管功能及视力等多种生物学功能。但有关其抗疲劳作用的研究未见报道。本实验观察蓝禾对小鼠运动性疲劳的作用，为开发具有抗疲劳功效的保健食品提供理论基础。

　　1 材料与方法

　　1. 1 实验动物及处理

　　雄性、6 ～ 7 周龄、清洁级昆明小鼠80 只，体质量18 ～ 22 g( 军事医学科学院卫生学环境医学研究所动物中心) 。实验小鼠分2 批进行实验。

　　( 1) 第1 批实验:昆明小鼠随机分为4 组，即对照组( CN，灌胃蒸馏水17. 5 ml /kg 体质量) 、低( L-LH 8. 75 ml /kg) 、中( MLH17. 5 ml /kg) 、高( H-LH 35. 08 ml /kg) 剂量LH干预组，每组10 只。连续灌胃28 d，测定小鼠负重游泳时间。

　　( 2) 第2 批实验: 根据第1 批实验结果，昆明小鼠随机分2 组，即对照组( CN，灌胃蒸馏水35. 08 ml /kg) 、高剂量蓝禾干预组( H-LH 35. 08 ml /kg) ，每组20 只。连续灌胃28 d，每组随机抽出10只小鼠测定血乳酸( LA) ; 其余小鼠测定血清尿素氮( BUN) 、肝糖原的含量。各指标具体测定方法参照《保健食品检验及评价技术规范》。两批实验期间，灌胃1 次/d，每3 d 测小鼠体质量1 次，期间动物自由摄食和饮水。

　　1. 2 受试物

　　LH 以蓝莓、黑米、江米、黍米等9 种谷物为原料，采用复合酶生物发酵工艺制成，170 ml /罐。蓝禾主要营养成分含量( /L) : 能量4950 kJ，蛋白质19. 4 g，碳水化合物170 g，蓝莓花色苷400 mg，谷氨酸792. 54 mg /门冬氨酸218. 35 mg、丙氨酸103. 1 mg等17 种氨基酸共1. 67 g，镁140 mg，钙10. 7 mg，铁3. 57 mg，锌3. 15 mg，铜0. 26 mg，硒6. 1 μg。

　　1. 3 主要仪器及试剂

　　超级酶标仪( uQuant，美国) ，高速台式离心机( 上海安亭科学仪器厂) ，电子天平( 天津天马衡基仪器有限公司) ，血清尿素氮测定试剂盒、血乳酸测定试剂盒、肝糖原测定试剂盒( 南京建成工程公司) 。

　　1. 4 方法

　　1. 4. 1 负重游泳实验末次给药30 min 后，将尾根部负荷5%体质量铅皮的小鼠置于水深40 cm、水温( 25 ± 1) ℃的游泳缸中游泳，不停搅动水保证小鼠四肢不停地运动，记录小鼠自游泳开始至力竭( 下沉10 s 不上浮) 的时间。

　　1. 4. 2 LA 含量测定末次给药30 min 后，从内眦静脉丛采血，然后不负重于水深40 cm，水温30℃的游泳缸中游泳。不停搅动水，保证小鼠四肢不停地运动。游泳10 min 后取出。于停止游泳后0、20 min，内眦静脉丛采血。按照LA 测定试剂盒要求检测LA 含量。

　　1. 4. 3 血清BUN 及肝糖原含量测定末次给药30 min 后，不负重于水深40 cm、水温30℃的游泳缸中游泳。不停搅动水以保证小鼠四肢不停地运动。游泳90 min 取出，休息60 min 后摘眼球取血。活杀小鼠，取肝脏，经生理盐水清洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100 mg。按照血清BUN、肝糖原测定试剂盒要求测定血清BUN、肝糖原的含量。

　　1. 5 统计学方法

　　采用SPSS21. 0 统计软件进行数据处理分析，结果以珋x ± s 表示。多组计量资料方差齐性采用单因素方差分析，两两比较采用LSD 检验。两组比较采用成组设计一元定量资料的t 检验。组内比较采用重复测量资料的方差分析。

　　2 结果

　　2. 1 蓝禾对小鼠体质量变化的影响

　　在实验期间，各组小鼠体质量均呈现增长的趋势，且组间无明显差异( P > 0. 05) ，提示LH 干预不影响小鼠的正常生长发育。

　　2. 2 蓝禾对小鼠LA 含量的影响

　　与游泳前比较，对照组小鼠游泳后LA 含量显著升高( P < 0. 001) ，游泳后20 min 对照组小鼠LA含量较游泳后0 min 显著降低( P < 0. 001) ，提示游泳可造成小鼠LA 含量的升高，但随着时间的延长，自身修复机制发挥作用，可下调LA 含量。与对照组比较，H-LH 干预组小鼠游泳后20 min LA 含量呈下降趋势，但无统计学意义( P > 0. 05) ，提示LH 可促进游泳后LA 的清除。

　　3 讨论

　　疲劳是机体体力活动达到一定程度后产生的一种自我保护的生理现象。在氧充足条件下，肝糖原分解为葡萄糖进入到血液中提供能量; 而在大强度活动时，机体处于相对低氧的状态，此时靠无氧糖酵解来提供能量并产生LA。当长时间运动后，蛋白质、氨基酸及其他含氮化合物会被降解，脱下的氨基形成尿素，故机体BUN 含量随运动负荷的增加而增加。可见肝糖原、LA、BUN 生化指标可反映机体的疲劳程度。黄诚胤等研究发现，与对照组比较，小鼠腹腔注射表没食子儿茶素没食子酸酯( EGCG) 28 d 可升高肝糖原的含量，降低血清中LA、BUN 的含量等发挥抗疲劳作用。裴素萍等采用参杞制剂进行抗疲劳实验得到相同的结论。本研究结果显示，LH 可提高小鼠的运动耐力( 负重游泳实验) ，增加小鼠的肝糖原储备，减少小鼠运动后体内BUN 的含量，提示LH 具有明确的抗疲劳作用。

　　疲劳的产生是由于能源物质消耗、代谢产物堆积、内环境稳定性失调、自由基影响等原因。自由基的生成是导致运动性疲劳的一个重要因素。机体剧烈运动时，体内氧自由基大量堆积，发生强烈的脂质过氧化反应，破坏生物膜功能，攻击线粒体，使ATP 的生成量和供给量减少，最终导致疲劳。LH 含有多种清除自由基、抗氧化的活性成分。蓝莓花色苷的分子结构上含有多个酚羟基，可自身氧化释放电子，直接清除自由基; 另外，其可升高细胞内超氧化物歧化酶和谷胱甘肽转换酶的活性，减轻氧化应激损伤。李早慧等研究发现蓝莓复方咀嚼片可提高小鼠的抗疲劳及耐低氧能力。锌是多种金属酶的组成成分或酶的激活剂，如超氧化物歧化酶、苹果酸脱氢酶、乳酸脱氢酶等，这些酶在抗氧化过程中发挥重要作用; 当细胞产生脂质过氧化损伤时，膜内巯基被氧化成二硫键，而锌与硫稳定的硫醇盐可防氧化，从而增强膜的稳定性和抗自由基的能力。硒可直接清除自由基; 另一方面，其是谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-PX) 的组成成分，GSH-PX 可清除体内脂质过氧化物，阻断活性氧和自由基对机体的损伤作用。此外，硒以某种特定形式与细胞膜结合构成膜结合硒而发挥抗氧化作用。有研究表明，锌及富含硒的食物具有明显的抗疲劳效应。LH 可能通过此类活性成分，发挥抗疲劳作用，但其作用机制还有待进一步探讨。